分子克隆实验指南(原书第4版上中下)/生命科学实验指南系列 下载 pdf 百度网盘 epub 免费 2025 电子版 mobi 在线

分子克隆技术30多年来一直是 生命科学领域实验室专业技术的基础。冷泉港实验室出版社出版的《分子克隆实验指南》一书拥有的可靠性和**性，使本书成为业内***、**影响力的实验室操作指南。《BR》第四版的《分子克隆实验指南》保留了之前版本中备受赞誉的细节和准确性，10个原有的核心章节经过 新，反映了标准技术的发展和创新，并介绍了一些前沿的操作步骤。同时还修订了第三版中的核心章节，以突出现有的核酸制备和克隆、基因转移及表达分析的策略和方法，并增加了12个新章节，专门介绍 激动人心的研究策略，包括利用DNA甲基化技术和染色质免疫沉淀的表观遗传学分析、RNAi、新一代测序技术，以及如何处理数据生成和分析的生物信息学，例如介绍了分析工具的使用，如何比较基因和蛋白质的序列，鉴定多个基因的常见表达模式等。本书还保留了 的附录，包括试剂和缓冲液、常用技术、检测系统、一般安全原则和危险材料。

上册

第1章 DNA的分离及定量

导言

方案1 SDS碱裂解法制备质粒DNA：少量制备

方案2 SDS碱裂解法制备质粒DNA：大量制各

方案3 从革兰氏阴性菌(如E.coli)中分离DNA

方案4 乙醇法沉淀DNA

方案5 异丙醇法沉淀DNA

方案6 用微量浓缩机进行核酸的浓缩和脱盐

方案7 丁醇抽提法浓缩核酸

方案8 聚乙二醇沉淀法制备M13噬菌体单链DNA

方案9 M13噬菌体铺平板

方案10 M13噬菌体液体培养

方案11 M13噬菌体双链(复制型)DNA的制备

方案12 利用有机溶剂分离纯化高分子质量DNA

方案13 用蛋白酶K和苯酚从哺乳动物细胞中分离高分子质量DNA

方案14 一步法同时提取细胞或组织中的DNA、RNA和蛋白质

方案15 从鼠尾或其他小样本中制备基因组DNA

替代方案：不使用有机溶剂从鼠尾分离DNA

替代方案：一管法从鼠尾中分离DNA

方案16 快速分离酵母DNA

方案17 微型凝胶电泳后使用溴化乙锭(EB)估算条带中DNA数量

方案18 利用Hoechst 33258通过荧光分析仪估算DNA浓度

方案19 用PicoGreen定量溶液中的DNA

信息栏

第2章 DNA分析

导言

方案1 琼脂糖凝胶电泳

方案2 琼脂糖凝胶中DNA的染色检测

方案3 聚丙烯酰胺凝胶电泳

方案4 聚丙烯酰胺凝胶中DNA的染色检测

方案5 聚丙烯酰胺凝胶中DNA的放射自显影检测

方案6 碱性琼脂糖凝胶电泳

附加方案：碱性琼脂糖凝胶的放射自显影

方案7 成像：放射自显影和感光成像

方案8 用玻璃珠从琼脂糖凝胶中回收DNA

方案9 低熔点琼脂糖凝胶中DNA的回收：有机溶剂抽提法

方案10 聚丙烯酰胺凝胶中DN 段的回收：压碎与浸泡法

方案11 Southern印迹

方案12 Southern印迹：DNA从一块琼脂糖凝胶同时向两张膜转移

方案13 采用放射性标记探针对固定在膜上的核酸DNA进行Southern杂交

附加方案：从膜上洗脱探针

信息栏

第3章 质粒载体克隆与转化

导言

方案1 制备和转化感受态大肠杆菌的Hanahan方法：高效转化策略

方案2 制备和转化感受态大肠杆菌的Inoue方法：“ 感受态”细胞

方案3 大肠杆菌的简单转化：纳米颗粒介导的转化

替代方案：一步法制备感受态大肠杆菌：在同一溶液中转化和储存细菌细胞

方案4 电穿孔法转化大肠杆菌

方案5 质粒载体克隆：定向克隆

方案6 质粒载体克隆：平末端克隆

方案7 质粒DNA的去磷酸化

方案8 向平末端DNA添加磷酸化衔接子／接头

方案9 克隆PCR产物：向扩增DNA的末端添加限制性酶切位点

方案10 克隆PCR产物：平末端克隆

方案11 克隆PCR产物：制备T载体

方案12 克隆PCR产物：TA克隆

方案13 克隆PCR产物：TOPO TA克隆

方案14 使用X-Gal和IPTG筛选细菌菌落α-互补

信息栏

第4章 Gateway重组克隆

导言

方案1 扩增Gateway载体

方案2 制备可读框入门克隆和目的克隆

方案3 应用多位点LR克隆反应制备目的克隆

信息栏

第5章 细菌人工染色体及其他高容量载体的应用

导言

方案1 BAC DNA的小量分离和PCR检验

方案2 BAC DNA的大量制备和线性化

方案3 通过脉冲电场凝胶电泳检验：BAC DNA的质量和数量

方案4 两步BAC工程：穿梭载体DNA的制备

方案5 A同源臂(A-Box)和B同源臂(B-Box)的制备

方案6 克隆A和B同源臂到穿梭载体

方案7 重组穿梭载体的制备和检验

方案8 通过电穿孔法转化重组穿梭载体到感受态BAC宿主细胞

方案9 共合体的检验和重组BAC克隆的筛选

……

第6章 真核细胞RNA的提取、纯化和分析

第7章 聚合酶链反应

第8章 生物信息学

中册

第9章 实时荧光聚合酶链反应定量检测DNA及RNA

0章 核酸平台技术

1章 DNA测序

2章 哺乳动物细胞中DNA甲基化分析

3章 标记的DNA探针、RNA探针和寡核苷酸探针的制备

4章 体外诱变方法

5章 向培养的哺乳动物细胞中导入基因

6章 向哺乳动物细胞中导入基因：病毒载体

下册

7章 利用报道基因系统分析基因表达调控

8章 RNA干扰与小RNA分析

9章 克隆基因的表达以及目的蛋白的纯化和分析

第20章 利用交联技术分析染色质结构与功能

第21章 紫外交联免疫沉淀(CLIP)技术进行体内RNA结合位点作图

第22章 Gateway相容酵母单杂交和双杂交系统

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书籍介绍

分子克隆技术30多年来一直是全球生命科学领域实验室专业技术的基础。冷泉港实验室出版的《分子克隆实验指南》一书拥有的可靠性和*性，使本书成为业内*流行、*具影响力的实验室操作指南。第四版的《分子克隆实验指南》保留了之前版本中备受赞誉的细节和准确性，10个原有的核心章节经过更新，反映了标准技术的发展和创新，并介绍了一些前沿的操作步骤。同时还修订了第三版中的核心章节，以突出现有的核酸制备和克隆、基因转移及表达分析的策略和方法，并增加了12个新章节，专门介绍*激动人心的研究策略，包括利用 DNA 甲基化技术和染色质免疫沉淀的表观遗传学分析、RNAi、新一代测序技术，以及如何处理数据生成和分析的生物信息学，例如介绍了分析工具的使用，如何比较基因和蛋白质的序列，鉴定多个基因的常见表达模式等。本书还保留了必不可少的附录：包括试剂和缓冲液、常用技术、检测系统、一般安全原则和危险材料。任何使用分子生物学技术的基础研究实验室都将因拥有一册《分子克隆实验指南》而受益。本书可作为学习遗传学、分子细胞生物学、发育生物学、微生物学、神经科学和免疫学等学科的重要指导，可供生物学、医药卫生，以及农、林、牧、渔、检验检疫等方面的科研、教学与技术人员参考。

Originally published in English as Molecular Cloning: A Laboratory Manual, Fourth Edition, by MichaelR.Green and Joseph Sambrook ? 2012 Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, NewYork, USA? 2017 Science Press. Print in China.Authorized Simplified Chinese translation of the English edition ? 2012 Cold Spring Harbor LaboratoryPress. This translation is published and sold by permission of Cold Spring Harbor Laboratory Press, the owner of all rights to publish and sell the same.